质量作用定律

动力学结合实验用于确定结合和解离速率常数。所有分析均假设结合遵循质量作用定律：

在任何给定的时间，受体-配体复合物的形成速率与放射性配体浓度和仍未占用的受体数量成正比。解离速率与受体-配体复合物的浓度成正比。

解离速率

解离结合实验测量放射性配体从受体解离的“解离率”。最初允许配体和受体结合，也许可达到平衡。此时，您需要阻止放射性配体与受体进一步结合（通过添加未标记的药物或通过稀释），以此可以测量解离速率，其遵循单相指数衰减，速率常数等于放射性配体解离速率。

结合速率

在结合实验中，加入放射性配体，然后在不同时间测量特异性结合。

结合随着时间的推移而增加，直至达到稳定状态。该稳定状态不同于Bmax。结合实验中的稳定状态取决于所用放射性配体的浓度，而Bmax外推至放射性配体的无限浓度。

结合增加的速率由三项因素（以及实验条件，如pH和温度）决定：

•结合速率常数，kon或k+1。这是您想要确定的值。

•放射性配体的浓度。如果使用更多放射性配体，则系统会更快达到平衡。

•解离速率常数，koff或k-1。一些人惊讶地发现，观察到的结合速率部分取决于解离速率常数。在温育过程中，放射性配体既与受体结合又与受体解离。当两个速率相等时，系统达到平衡状态。观察到的结合速率衡量达到平衡需要多长时间。如果放射性配体很快从受体上解离，则将会更快达到平衡（但结合较少）。

因此，无法使用一个简单的结合实验确定结合速率常数，除非您限制解离速率常数的值，使用两个或多个放射性配体浓度衡量结合动力学，或在一个实验中确定结合速率和解离速率。