质量作用定律

动力学结合实验用于确定结合速率常数和离解速率常数。所有分析都假定结合遵循质量作用定律：

在任何给定时间内，受体-配体复合物的形成速率与放射性配体浓度和仍未被占用的受体数量成正比。解离率与受体-配体复合物的浓度成正比。

解离率

解离结合实验测量放射性配体与受体解离的 "关闭速率"。最初，配体和受体被允许结合，或许达到平衡。此时，您需要阻止放射性配体与受体的进一步结合（通过添加未标记的药物或稀释），这样您就可以测量解离速率，该速率遵循单相指数衰减，其速率常数等于放射性配体的解离速率。

结合率

在关联实验中，您加入放射性配体，并在此后的不同时间测量特异性结合。

结合率会随着时间的推移而增加，直至达到稳定状态。该高点与最大结合率不同。关联实验中的平台依赖于所使用的放射性配体浓度，而最大结合力则是根据放射性配体的无限浓度推算出来的。

结合增加的速率由三个因素（以及 pH 值和温度等实验条件）决定：

•结合速率常数 kon 或 k+1。这就是您要确定的。

•放射性配体的浓度。如果使用更多的放射性配体，系统平衡的速度会更快。

•解离速率常数 koff 或 k-1。有些人惊讶地发现，观察到的结合速率部分依赖于解离速率常数。在培养过程中，放射性配体既与受体结合，又与受体解离。当这两个速率相等时，系统达到平衡。观察到的结合率衡量达到平衡所需的时间。如果放射性配体与受体的解离速度很快，则达到平衡的速度会更快（但结合的程度会降低）。

因此，拟合一个简单的结合实验来确定结合速率常数是不可能的，除非您制约解离速率常数的值，用两种或两种以上浓度的放射性配体测量结合动力学，或在一次实验中确定结合和解离的速率。