引言

仅观察单一浓度放射性配体的结合情况无法确定结合速率常数。配体达到平衡的速率不仅取决于结合速率常数和配体浓度，还取决于解离速率常数。

确定结合速率常数的一种方法是全局拟合 两种不同浓度放射性配体得到的数据 。这里解释的另一种方法是在一次实验中测量结合和解离。

加入放射性配体并在多个时间点测量总结合，然后在 Time0 开始解离（通过加入拮抗剂或大量稀释），然后在不同时间测量解离。

步骤

创建 XY 数据表。在 X 中输入以分钟为单位的时间，在 Y 中输入总结合。

从特异性结合表中点击分析，选择非线性回归，选择动力学结合方程面板，然后选择结合然后离解。

将 HotNM（[放射性配体，单位 nM] 和 Time0（解离开始的时间）限制为初始值。如果您在 Y 栏中输入了特异性结合，则还应将 NS 约束为常数 0。

模型

放射性配体=HotNM*1e-9

Kob=[放射性配体]*Kon+Koff

Kd=Koff/Kon

Eq=Bmax* 放射性配体/（放射性配体 + Kd）

关联=Eq*(1-exp(-1*Kob*X))

YatTime0 = Eq*(1-exp(-1*Kob*Time0))

解离= YatTime0*exp(-1*Koff*(X-Time0))

Y=IF(X<Time0, 解离) + NS

 

解读参数

Koff是解离常数，单位为 min-1。

Kon是以分钟为单位的关联常数乘以反浓度。

KD由 Koff/Kon 计算得出。以摩尔单位表示。

Bmax是最大浓度放射性配体平衡时的最大结合量，以 Y 轴为单位。除非您使用了非常高浓度的放射性配体，否则 Bmax 的置信区间会很宽，因为实验并不是为了确定 Bmax 而设计的。

NS是非特异性结合，以 Y 轴为单位。它是 0 时的 Y 值，也是配体全部解离后的 Y 值。

注释