引言

测量放射性配体的结合速率时，结合平衡的速率不仅依赖于结合速率常数和配体的用量，还依赖于配体的解离速率常数。(为什么？）通过分析一种浓度放射性配体的结合数据来拟合结合速率常数的唯一方法，就是将解离速率常数约束为您在不同实验中确定的值。

确定结合速率常数的另一种方法是全局拟合多种放射性配体浓度下获得的数据，或者分析同时测量结合和解离速率的实验。

步骤

创建 XY 数据表。在 X 中输入以分钟为单位的时间，在 Y 中输入特异性结合。

在特异性结合表中单击分析，选择非线性回归，选择动力学结合方程面板，然后选择结合动力学--一种浓度的热。

您必须将 Hotnm（[放射性配体]，单位为 nM）和 Koff（解离速率常数，单位为反分钟）限制为常数。

模型

Kd=Koff/Kon

L=Hotnm*1e-9

Kob=Kon*L+Koff

占有率=L/(L+Kd)

Ymax= 占用率*Bmax

Y=Ymax*(1 - exp(-1*kob*X))

解读参数

Kon是结合速率常数，单位为 M-1 min-1

Koff是解离速率常数，单位为 min-1

Kd是平衡解离常数，单位为摩尔，计算公式为 Koff/Kon

Bmax是平衡时的最大结合量，推断为最大放射性配体浓度，单位为输入 Y 值所用的单位。

注释