引言

除非可基于其他实验将koff限制为一个常数，否则无法基于在单一浓度的放射性配体条件下测得的kon。观察到的结合速率取决于结合速率常数、所用配体的量及其解离速率常数。对于一种浓度的放射性配体，结果模糊。

如果用多个放射性配体浓度进行结合动力学实验，可以将数据全局拟合到结合动力学模型中，从而得出kon和koff的单个最佳拟 合估计值。

下文给出了一个使用两种浓度的放射性配体进行的结合动力学实验示例。当然，两次运行的所有其他条件（温度、酸碱度等）均相同。将时间输入X列，将一种浓度的放射性配体的特异性结合输入第一个（A）Y列，将另一种浓度的结合输入B列。

循序渐进

创建一张XY数据表。将时间（单位为分钟）输入到X中，将总结合输入到Y中。将一种浓度的放射性配体结合输入到A列中，将另一种浓度的结合输入到B列中等。在列标题中输入浓度，单位为nM。

从特异性结合表中，单击“分析”，选择“非线性回归”，选择“动力学结合方程”窗格，然后选择结合 - 两个或以上次热浓度。

模型

Kd=Koff/Kon

L=Hotnm*1e-9

Kob=Kon*L+Koff

Occupancy=L/（L+Kd）

Ymax=Occupancy*Bmax

Y=Ymax*（1 - exp（-1*kob*X））

解读参数

Koff是解离速率常数，单位为min-1。

Kon是结合速率常数（M）-1 min-1。

Kd是平衡解离常数（mol），计算公式为Koff/Kon

Bmax是平衡时的最大结合，在最大放射性配体浓度下，以您用来输入Y的单位表示

注释

根据质量作用定律，koff与kon之比为受体结合的Kd：

将这样计算的Kd（从动力学实验中）与从饱和结合曲线中确定的Kd进行比较。如果结合遵循质量作用定律，则两个Kd值应不可区分。