在饱和结合实验中,您需要改变放射性配体的浓度并测量平衡时的结合情况。目的是确定 Kd(平衡时与一半受体位点结合的配体浓度)和 Bmax(结合位点的最大数量)。
配体不仅与受体位点结合,还与非特异性位点结合。处理非特异性结合有三种方法。
•减去非特异性,只分析特异性结合。
•只分析总结合,从总结合曲线的形状推断非特异性结合的量。
•全局拟合总结合与非特异性结合。
我们推荐第三种方法(全面拟合总结合力和非特异性结合力)。拟合特异性结合的问题在于,您必须做出一些假设才能从总结合中减去非特异性,而您拟合的结果值并不是真正的数据。在可能的情况下,我们建议您拟合实际收集到的数据,避免创建衍生数据集(本例中为特异性结合力)。
拟合总结合只需要较少的数据,所以可以节省实验时间和金钱。但大多数人认为,在没有实验测量非特异性结合的情况下,纯粹根据结合曲线的形状来定义非特异性结合是不合适的。仅拟合总结合的一个优点是,即使有相当一部分配体结合,导致配体耗竭(游离浓度大大低于添加浓度),也能推导出拟合此类数据的方程。
Prism 提供拟合一个或两个位点的模型。您可以使用 "比较"选项卡中的选项对两种拟合进行比较。在比较单位点和双位点模型拟合时,请使用统计常识。如果其中一个位点只占总位点的很小一部分,或者其 Kd 超出了您在实验中使用的放射性配体浓度范围,则不要接受双位点模型。