引言

您不必直接测量非特异性结合。相反，您可以假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比，仅通过拟合总结合来确定 Bmax 和 Kd。

如果只有一小部分放射性配体结合，则可以使用更简单的模型。

这个等式允许加入的配体有相当一部分结合。这种方法只适用于放射性配体，因此对添加配体和结合配体的评估采用相同的每分钟计数单位。这种方法不适用于荧光配体。

步骤

创建 XY 数据表。在 X 列输入放射性配体浓度，在 Y 列输入总结合量。如果有多个实验条件，则将第一个实验条件放入 A 列，第二个实验条件放入 B 列，等等。

以 CPM 单位输入 X 和 Y。这对分析工作至关重要。

从总结合表中单击 "分析"（Analyze），选择非线性回归，选择 "饱和结合方程"面板，然后选择 "单位点--总结合"（One site -- Total），计算配体耗竭。

您必须根据实验设计将两个参数限制为恒定值：

•SpAct 是特异性放射性，单位为 cpm/fmol

•Vol 是反应体积（毫升

模型

KdCPM=KdnM * Vol * 1000 * SpecAct 

(nm/L * mL * 0.001 L/ml * 1000000 fmol/nmol * cpm/fmol)

a=-1-NS

b=KdCPM + NS*KdCPM + X + 2*X*NS + Bmax

c=-1*X*(NS*KdCPM + X*NS+Bmax)

Y=(-b+sqrt(b*b-4*a*c) )/(2*a) ;Y 单位为 cpm

 

解读参数

Bmax是最大特异性结合力，单位为 cpm。

KdnM是平衡解离常数，单位为 nM。

NS是非特异性结合斜率（Y 单位除以 X 单位）。

注释

该分析考虑到了大部分添加的放射性配体会与受体结合这一事实。如果您可以假定只有一小部分放射性配体与受体结合，这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎相同，请使用替代分析。

参考文献                                                                         

该公式来自S. Swillens（《分子药理学》，47: 1197-1203，1995 年）