引言

您不必直接测量非特异性结合而是可通过假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比，仅拟合总结合，来确定Bmax和Kd。

如果仅一小部分放射性配体结合，则可采用简单模型。

该方程允许大部分添加的配体结合，仅对放射性配体有效，因此在评估添加配体和结合配体时采用相同的每分钟计数单位，这种方法不适用于荧光配体。

循序渐进

创建一张XY数据表。将放射性配体浓度输入X，将总结合速度输入Y。如果您有若干个实验条件，则将第一个输入A列，第二个放入B列，依此类推。

输入X和Y，以CPM为单位。这对于分析工作至关重要。

从总结合表中，单击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程窗格，然后选择 单位点 -- 总计，说明配体耗尽。

根据您的实验设计，您必须将两项参数限制为常数值：

•SpAct为比放射性活度，单位为cpm/fmol

•Vos为反应体积，单位为ml。

模型

KdCPM=KdnM * Vol * 1000 * SpecAct

；（nm/L * mL * 0.001 L/ml * 1000000 fmol/nmol * cpm/fmol）

a=-1-NS

b=KdCPM+NS*KdCPM+X+2*X*NS+Bmax

c=-1*X*（NS*KdCPM+X*NS+Bmax）

Y=（-b+sqrt（b*b-4*a*c））/（2*a）；Y以cpm为单位

 

解读参数

Bmax是最大特异性结合（cpm）。

KdnM是平衡解离常数（nM）。

NS是非特异性结合的斜率：以Y单位除以X单位为单位。

注释

该分析解释了以下事实：大部分添加的放射性配体与受体结合。如果您能够假设仅一小部分放射性配体结合，这意味着您添加的浓度几乎与游离浓度相同，采用替代分析。

参考文献                                                                         

该方程来自S. Swillens（《分子药理学》，47：1197-1203，1995）