引言

在饱和结合实验中，您需要改变放射性配体的浓度并测量结合情况。目的是确定 Kd（平衡时与一半受体位点结合的配体浓度）和 Bmax（结合位点的最大数量）。

配体不仅与受体位点结合，还与非特异性位点结合。处理非特异性结合有三种方法。

•减去非特异性，只分析特异性结合。

•只分析总结合，从总结合曲线的形状推断非特异性结合的量。了解更多

•一次性分析总结合和非特异性结合。这是最好的方法，详细说明如下。

步骤如下

创建 XY 数据表。在 X 列输入放射性配体浓度，在 Y 列输入总结合力，在 B 列输入非特异性结合力。

X 使用任何方便的单位，Kd 将以相同的浓度单位报告。总结合力和非特异性结合力使用相同的单位。Bmax 将以相同的单位报告。

或者选择样本数据集：结合 - 总结合与非特异性结合的饱和度。

从数据表中单击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程面板，然后选择单位点-总结合和非特异结合。

考虑将参数 Background 约束为常数 0。这是在没有添加放射性配体结合时测得的 "结合"，因此代表反背景（如果有的话）。

模型

特异性=Bmax*X/（X+Kd）

非特异性=NS*X + 背景

<A>Y=特异性+非特异性

<B>Y=非特异性

 

<A> 和 <B> 语法表示第三行仅用于数据集 A（总结合），而第四行仅用于数据集 B（非特异性）。

参数 NS 和 Background 在两个数据集之间共享。

解读参数

Bmax是最大特异性结合力，单位与 Y 相同。它是根据放射性配体的极高浓度推断出的特异性结合力，因此其值几乎总是高于实验中测得的任何特异性结合力。

Kd是平衡解离常数，单位与 X 相同，是在平衡时达到半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS是以 Y 单位除以 X 单位的非特异性结合斜率。

本底是指未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器背景。如果计数器自动减去本底信号，则可将本底限制为一个恒定的零值。