引言

您不必直接测量非特异性结合。取而代之的是，您可通过假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比，仅拟合总结合，来确定Bmax和Kd。

循序渐进

创建一张XY数据表。将放射性配体浓度输入X，将总结合速度输入Y。如果有若干个实验条件，则将第一个输入A列，第二个放入B列，依此类推。

X和Y使用任何实用单位。将以与X相同的单位报告Kd，且以与Y相同的单位报告Bmax。

从总结合表中，单击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程窗格，然后选择单位点--总结合。

考虑将参数背景约束为常数值零。这是在不添加放射性配体结合时测量的“结合”，因此，其表示计数器背景（如有）。

模型

Y=Bmax*X/（Kd+X）+NS*X+背景

 

解读参数

Bmax为最大特异性结合，采用与Y相同的单位。

Kd为平衡解离常数，采用与X相同的单位。这是处于平衡状态时，达到一半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS为非特异性结合的斜率：以Y单位除以X单位为单位。

背景 为在无添加放射性配体情况下的非特异性结合量。这表示计数器背景。如果计数器自动减去背景信号，则可将背景约束为常数值零。

注释

该分析假设仅一小部分放射性配体结合，这表示您添加的浓度几乎与游离浓度相同。如果无法做出这一假设，则采用替代分析。