引言

您不必直接测量非特异性结合。相反，您可以假设非特异性结合的量与放射性配体的浓度成正比，仅通过拟合总结合来确定 Bmax 和 Kd。

具体步骤

创建 XY 数据表。将放射性配体浓度填入 X 列，将总结合量填入 Y 列。如果有多个实验条件，则将第一个条件填入 A 列，第二个条件填入 B 列，等等。

Kd 将以与 X 相同的单位报告，Bmax 将以与 Y 相同的单位报告。

从总结合表中点击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程面板，然后选择单位点--总结合。

考虑将参数 Background 约束为常数 0。这是在没有添加放射性配体结合时测得的 "结合"，因此代表反本底（如果有的话）。

模型

Y=Bmax*X/(Kd+X) + NS*X + Background

 

解读参数

Bmax是最大特异性结合力，单位与 Y 相同。

Kd是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是在平衡时达到半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS是以 Y 单位除以 X 单位的非特异性结合斜率。

背景是指未添加放射性配体时的非特异性结合量。这代表计数器背景。如果计数器自动减去本底信号，则可将本底限制为一个恒定的零值。

注意事项

本分析假设只有一小部分放射性配体结合，这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎相同。如果做不到这一点，请使用替代分析。