引言

在高浓度下，一些底物也会抑制酶的活性。约为所有已知酶的20%时，会发生底物抑制。两个底物分子可与酶结合，阻断活性时，就会发生这种情况。

循序渐进

创建一张XY数据表。在X列中输入底物浓度，在Y列中输入酶活性。如果有多个实验条件，请将第一个放入A列，第二个放入B列，依此类推。

输入数据后，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“酶动力学方程”窗格，然后选择底物抑制。

模型

Y=Vmax*X/（Km+X *（1+X/Ki））

参数

Vmax是最大酶反应速度， 如果底物没有抑制酶的活性，采用与Y相同的单位表示

Km 是米氏常数，采用与X相同的单位。它描述了在无抑制剂的情况下，底物和酶的相互作用。

Ki 是 底物结合的解离常数，使得两种底物可与酶结合，采用与X相同的单位。

注：Prism 7和更高版本使用的初始值规则集（改进）不同于Prism 6。

为什么该模型并不总是进行收敛拟合

如果重新排列，更容易理解拟合该模型的问题：

Y=Vmax/（Km/X+1+X/Ki）

Vmax控制峰值的高度（但不等于峰值处的Y值）。

X值很小时，最后一项接近零，因此曲线的前部分（小X值）由Km值决定。

相反，X值较大时，第一项接近零，因此曲线的后面部分（较高的X值）由Ki值决定。

曲线的中间部分由Ki和Km决定。

两个原因可解释为什么拟合会导致“模糊”的结果。

•在足够宽的X值范围内，不存在数据点。需要存在小于Km和大于Ki的X值，最好有大量的X值。如果仅曲线中间有数据，则没有信息来分别确定Km和Ki。

•曲线的形状虽然看起来像底物抑制曲线，但并不完全正确。换言之，数据不符合底物抑制模型。

参考文献                                                                         

方程5.44，见：RA Copeland， 《酶》， 第2版，Wiley，2000。