引言

大部分添加的放射性配体与受体结合时，这种竞争性结合模型是有用的，因此，添加的浓度大于游离浓度。

这些方程允许大部分添加的配体结合。其仅对放射性配体有效，因此在评估添加配体和结合配体时采用相同的每分钟计数单位。这种方法不适用于荧光配体。

循序渐进

创建一张XY数据表。将未标记化合物的摩尔浓度对数输入到X，且与Y结合。Y值必须以cpm为单位。

如果有几个实验条件，将第一个放入A列，第二个放入B列，依此类推。使用子列输入副本。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争结合方程”窗格，然后选择“单位点--异源耗竭”。

根据您的实验设计，您必须将四项参数限制为常数值：

•Hot是标记的配体量（cpm）。整个实验使用单一浓度的放射性配体。

•KdNM是标记配体的平衡解离常数（nM）。

•SpAct是特定放射性，单位为cpm/fmol。

•Vol是反应体积，单位为ml。

模型

KdCPM=KdnM*SpAct*vol*1000

；nmol/L *（cpm/fmol * ml * .001L/ml * 1000000fmol/nmol）=cpm

R=NS+1

S=[1+10^（X-LogKi）]*KdCPM+Hot

a=-1*R

b=R*S+NS*Hot + Bmax

c=-1*Hot*（S*NS+Bmax）

Y=（-1*b+sqrt（b*b-4*a*c））/（2*a）

 

解读参数

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki是平衡解离常数（摩尔）。

Bmax 是配体与受体的最大结合，单位为cpm。代表与所有受体的结合，因此高于曲线顶部稳定段。

NS是结合非特异性位点的放射性配体的一部分。

注释

该分析解释了以下事实：大部分添加的放射性配体与受体结合。如果您能够假设仅一小部分放射性配体结合，这意味着您添加的浓度几乎与游离浓度相同，采用替代分析。

 

参考文献                                                                         

该方程来自S. Swillens（《分子药理学》，47：1197-1203，1995）