引言

当加入的大部分放射性配体与受体结合，因此加入的浓度大于游离浓度时，这种竞争性结合模型就很有用。

这些等式允许加入的配体有很大一部分与受体结合。这种方法只适用于放射性配体，因此对添加配体和结合配体的评估采用相同的每分钟计数单位。这种方法不适用于荧光配体。

步骤

创建 XY 数据表。在 X 中输入未标记化合物摩尔浓度的对数，在 Y 中输入结合情况。

如果有几种实验条件，将第一种放入 A 栏，第二种放入 B 栏，等等。使用子列输入重复数据。

在数据表中单击 "分析"，选择非线性回归，选择 "竞争性结合方程"面板，然后选择 "单位点--异源耗竭"。

您必须根据实验设计将四个参数限制为恒定值：

•Hot 是标记配体的量，单位为 cpm。整个实验使用单一浓度的放射性配体。

•KdNM 是标记配体的平衡解离常数，单位为 nM。

•SpAct 是特异性放射性，单位为 cpm/fmol。

•Vol是反应体积（毫升）。

模型

KdCPM=KdnM*SpAct*vol*1000 

nmol/L *(cpm/fmol * ml * .001L/ml * 1000000fmol/nmol) = cpm

R=NS+1

S=[1+10^(X-LogKi)]*KdCPM+Hot

a=-1*R

b=R*S+NS*Hot + Bmax

c= -1*Hot*(S*NS + Bmax)

Y= (-1*b + sqrt(b*b-4*a*c))/(2*a)

 

解读参数

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki是以摩尔为单位的平衡解离常数。

Bmax 是配体与受体的最大结合力，单位为 cpm。这代表与所有受体的结合，因此高于曲线的顶峰。

NS是放射性配体与非特异性位点结合的比例。

注释

该分析考虑到了大部分添加的放射性配体与受体结合这一事实。如果您可以假定只有一小部分放射性配体与受体结合，这意味着您添加的浓度与游离浓度几乎相同，请使用替代分析。

 

参考文献                                                                         

该公式来自S. Swillens（《分子药理学》，47: 1197-1203，1995 年）