引言

您可以通过测量未标记配体与放射性配体的竞争性结合来确定其平衡解离常数。

步骤如下

创建 XY 数据表。在 X 列中输入未标记化合物浓度的对数，在 Y 列中输入结合浓度的对数。使用子列输入重复数据。

从数据表中单击 "分析"，选择非线性回归，选择竞争性结合方程面板，然后选择 "单位点 - 拟合 Ki"。

您必须根据实验设计将两个参数限制为常数：

•HotNM 是标记配体的浓度，单位为 nM。整个实验使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNM 是标记配体的平衡解离常数，单位为 nM。

模型

logEC50=log(10^logKi*(1+HotNM/HotKdNM))

Y= (顶部-底部)/(1+10^(X-logEC50)) + 底部

 

 

解读参数

顶部 和 底部 是以 Y 轴为单位的高原。

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki是以摩尔为单位的平衡解离常数。

注释

该模型直接拟合未标记配体的 Ki。它不报告 EC50，因此您无需应用 Cheng 和 Prusoff 修正法(1)。您只需输入放射性配体的浓度及其 Kd 作为常数，Prism 就会直接拟合出冷化合物的 Ki。如果想知道 IC50，可以拟合一条对数（剂量）反应曲线。

如果您想知道 IC50（在这种情况下信息量不大），则使用另一个方程拟合数据。

该分析假定只有一个位点，且结合是可逆的，处于平衡状态。

 

1.Cheng, Y. and Prusoff, W. H. inhibition constant (K1) and the concentration of inhibitor which causes 50 per cent inhibition (I50) of an enzymatic reaction.Biochem Pharmacol, 22: 3099-3108, 1973.