引言

通过测量放射性配体结合的竞争，可确定未标记配体的平衡解离常数。

循序渐进

创建一张XY数据表。将未标记化合物的浓度的对数输入到X中，并结合到Y中。如果有几个实验条件，将第一个放入A列，第二个放入B列，依此类推。使用子列输入重复项。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争结合方程”窗格，然后选择单位点-拟合Ki

根据实验设计，您必须将两项参数限制为常数值：

•RadioligandNM是标记配体的浓度，单位为nM。整个实验使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNM是标记配体的平衡解离常数，单位为nM。

模型

logEC50=log（10^logKi*（1+RadioligandNM/HotKdNM））

Y=底部+（顶部-底部）/（1+10^（X-LogEC50））

 

 

解读参数

顶部 和底部均为以Y轴为单位的稳定段。

logKI 是未标记配体的摩尔平衡解离常数的对数。

Ki是平衡解离常数，单位为摩尔。

注释

该模型直接拟合未标记配体的Ki。它不报告EC50，因此无需应用Cheng和 Prusoff 修正（1）。取而代之的是，您输入放射性配体的浓度及其常数 Kd，Prism将直接拟合冷化合物的Ki。如果您想了解IC50，则拟合log（剂量）反应曲线。

如果您想了解IC50（在此情况下，IC50的信息不太丰富），则通过替代方程拟合数据。

分析假设您有一个位点，该结合可逆且处于平衡状态。

 

1.Cheng, Y.和Prusoff, W. H.。抑制常数（K1）与对酶促反应产生50%抑制（I50）的抑制剂浓度之间的关系。《生化药理学杂志》，22: 3099-3108，1973。