引言

您可以通过测量未标记配体与放射性配体的竞争性结合来确定其平衡解离常数。该模型假定存在两类对放射性配体和竞争者具有不同亲和力的位点。

步骤

创建 XY 数据表。将未标记化合物摩尔浓度的对数输入 X 列，将结合情况输入 Y 列。使用子列输入重复数据。

在数据表中点击分析，选择非线性回归，选择竞争性结合方程面板，然后选择双位点 - 拟合 logIC50。

模型

logEC50Lo=log(10^logKiLo*(1+HotNM/HotKdNMLo))

logEC50Hi=log(10^logKiHi*(1+HotNM/HotKdNMHi))

跨度=顶部 - 底部

Part1=FractionHi*Span/(1+10^(X-LogEC50Hi) )

Part2=(1-FractionHi)*Span/(1+10^(X-LogEC50Lo) )

Y= 底部 + 部分 1 + 部分 2

 

 

 

解读参数

顶部 和 底部 是以 Y 轴为单位的高原。

FractionHi是对竞争者具有高亲和力的所有位点的分数。

logIC50Hi和logIC50Lo是两个 IC50 值的对数。

注释

该模型拟合未标记配体的两个 IC50 值。它不报告两个 Ki 值。Ki 值依赖于 IC50、放射性配体浓度及其结合 Kd。您可以使用不同的方程直接拟合 Ki 值。

该分析假设您知道两个位点对标记配体的亲和力。在许多情况下，放射性配体对两个位点具有相同的亲和力。在这种情况下，只需输入两次该值即可。如果两个位点对标记配体的亲和力不同，则输入两个值（根据其他实验确定）。注意标签。常数 HotKdnmHi 是热配体对未标记配体亲和力高的受体的 Kd，而 HotKdnmLo 是热配体对未标记配体亲和力低的受体的 Kd。因此，HotKdnmHi 可能大于或小于 HotKdnmLo。

本分析假设结合是可逆的，并且处于平衡状态。它还假设标记配体和未标记配体竞争相同的结合位点。