引言

通过测量放射性配体结合的竞争，可确定未标记配体的平衡解离常数。该模型假设存在两类对放射性配体和竞争配体具有不同亲和力的位点。

循序渐进

创建一张XY数据表。将未标记化合物的摩尔浓度的对数输入到X中，并结合到Y中。如果有几个实验条件，将第一个放入A列，第二个放入B列，依此类推。使用子列输入重复项。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争结合方程”窗格，然后选择双位点 - 拟合logIC50。

模型

logEC50Lo=log（10^logKiLo*（1+HotNM/HotKdNMLo））

logEC50Hi=log（10^logKiHi*（1+HotNM/HotKdNMHi））

Span=Top - Bottom

Part1=FractionHi*Span/（1+10^（X-LogEC50Hi） ）

Part2=（1-FractionHi）*Span/（1+10^（X-LogEC50Lo） ）

Y=Bottom+Part1+Part2

 

 

 

解读参数

顶部和底部均为以Y轴为单位的稳定段。

FractionHi是对竞争配体具有高亲和力的所有位点的分数。

logIC50Hi和logIC50Lo 是两个IC50值的对数。

注释

该模型拟合未标记配体的两个IC50值。其不报告两个Ki值。Ki值取决于IC50、放射性配体的浓度及其结合的Kd。您可使用不同方程直接拟合Ki值。

分析假设已知两个位点对标记配体的亲和力。在许多情况下，放射性配体对两个位点具有相同亲和力。在此情况下，仅需输入该值两次。如果两个位点对标记配体具有不同亲和力，则输入两个值（由其他实验确定）。注意标签。常数HotKdnmHi是对未标记配体具有高亲和力的受体的热配体的 Kd，HotKdnmLo是对未标记配体具有低亲和力的受体的热配体的Kd。因此HotKdnmHi可能比HotKdnmLo大或小。

该分析假设结合可逆且处于平衡状态，还假设标记和未标记配体竞争相同结合位点。