在许多实验情况下，您可以假设配体的极小部分与受体（或非特异性位点）结合。在这些情况下，您还可以假设配体的游离浓度近似等于您添加的浓度。这一假设大大简化了结合实验的分析，标准分析方法也依赖于这一假设。

在其他情况下，大部分配体会与受体结合（或非特异性结合）。这意味着溶液中游离的配体浓度不等于您添加的浓度。这种差异并不是在所有试管或所有时间都一样。游离配体浓度会因结合而耗尽。

许多研究者使用这样的经验法则：如果结合的配体少于 10%，就不用担心配体耗竭；如果结合的配体超过 10%，就有三种选择：

•改变实验条件。在不改变组织量的情况下增加反应体积。这种方法的问题是需要更多的放射性配体，而放射性配体通常非常昂贵。

•测量每个试管中配体的游离浓度。如果使用离心或平衡透析，这种方法是可行的，但如果使用真空过滤去除游离放射性配体，则相当困难。

•使用可调整添加配体浓度与游离配体浓度之间差异的分析技术。Prism 包含用于分析饱和与竞争数据的此类模型。这些特殊分析只适用于放射性配体，因此对添加配体和结合配体的评估采用相同的每分钟计数单位。这些方法不适用于荧光配体。