引言

在饱和结合实验中，改变放射性配体的浓度，并测量结合度。目的是确定Kd（平衡时结合一半受体位点的配体浓度）和Bmax（最大结合位点数）。

配体不仅结合受体位点，还结合非特异性位点，处理非特异性结合有三种方法。

•减去非特异性，然后仅分析特异性结合。

•仅分析总结合，根据总结合曲线的形状，推断非特异性结合的量。配体结合到两个位点时，这种方法效果并不好

•同时全局分析总结合和非特异性结合。这是最好的方法，且详细解释如下。

循序渐进

创建一张XY数据表。将放射性配体浓度输入到X，将总结合输入到Y，且将非特异性结合输入到B列。

对X使用任何实用单位。将在这些相同的浓度单位中报告Kd。对总结合和非特异性结合使用相同单位。将以相同的单位报告Bmax。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“饱和结合方程”窗格，然后选择双位点--总结合和非特异性结合。

“背景”参数指在不添加放射性配体结合时测量的“结合”，因此，其表示计数器背景（如有），考虑将其约束为常数值零

模型

特异性1=BmaxHi*X/（X+KdHi）

特异性2=BmaxLo*X/（X+KdLo）

非特异性=NS*X+背景

<A>Y=特异性c1 + 特异性2 + 非特异性

<B>Y=非特异性

 

＜A＞和＜B＞语法表示，第四行仅用于数据集A（总结合），而第四行仅用于数据集B（非特异性结合）。

参数NS和背景在两个数据集之间共享。

解读参数

BmaxHi 和 BmaxLo 是以与Y相同单位对两个位点的最大特异性结合。

KdHi 和 KdLo是平衡解离常数，以与X相同的单位。这是处于平衡状态时，达到一半最大结合所需的放射性配体浓度。

NS是非特异性结合的斜率：以Y单位除以X单位为单位。

背景为在未添加放射性配体情况下的非特异性结合量。这表示计数器背景。如果您的计数器自动减去背景信号，则可将背景约束为常数值零。