引言

在饱和结合实验中，您需要改变放射性配体的浓度并测量结合情况。目的是确定两种受体的 Kd（平衡时与一半受体位点结合的配体浓度）和 Bmax（最大结合位点数）。

配体不仅与受体位点结合，还与非特异性位点结合。处理非特异性结合有三种方法。

•减去非特异性，只分析特异性结合。请继续阅读这种方法。

•只分析总结合量，从总结合曲线的形状推断非特异性结合量。当存在两类受体时，这种方法效果不佳。

•一次性分析总结合和非特异性结合。了解更多。

步骤

创建 XY 数据表。如果有多个实验条件，则将第一个条件放入 A 列，第二个条件放入 B 列，等等。

然后使用 "移除基线"（Remove Baseline）分析从 A 列中减去 B 列，创建一个包含特异性结合的新结果表。

在特异性结合表中点击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程面板，然后选择双位点--特异性结合。

模型

位点 1=BmaxHi*X/(KdHi+X)

位点 2=BmaxLo*X/(KdLo+X)

Y=位点 1 + 位点 2

 

解读参数

BmaxHi 和 BmaxLo是两个位点的最大特异性结合，单位与 Y 相同。

KdHi 和 KdLo是平衡解离常数，单位与 X 相同。它是在平衡时达到半最大结合所需的放射性配体浓度

两个位点结合的 Scatchard 图

下图左侧显示了放射性配体与两个独立结合位点的结合情况，这两个位点的浓度相等，但 Kd 相差十倍。两条曲线分别以虚线和实线表示。在做实验时，无法观察到单个成分，只能观察到总和，即实线。请注意，这条曲线并不是明显的双相曲线。

右图显示的是 Scatchard 图上的相同数据。与每个受体的结合以直线（点或虚线）表示。在 Scatchard 图上绘制的总结合力呈曲线。请注意，表示与每种受体结合的两条直线并不是曲线的渐近线。

要绘制与非线性回归拟合值相对应的两条直线，请使用非线性回归确定的 Bmax 和 Kd 值创建一个新的数据表，如下图所示定义两条直线。

转到 Scatchard 变换数据的图表，并将新建数据表和图表拖到该图表中。使用 "设置图表格式 "对话框，使用连接线但不使用符号绘制表格中的两个数据集。