引言

在饱和结合实验中，改变放射性配体的浓度，并测量结合度。目标是确定两种受体的Kd（平衡时结合一半受体位点的配体浓度）和Bmax（最大结合位点数）。

配体不仅结合受体位点，还结合非特异性位点。处理非特异性结合有三种方法。

•减去非特异性结合，且仅分析特异性结合。请继续阅读这种方法。

•仅分析总结合，根据总结合曲线的形状，推断非特异性结合的量。有两类受体时，这种方法效果不佳。

•同时全局分析总结合和非特异性结合。了解更多。

循序渐进

创建一张XY数据表。将放射性配体浓度输入X，将特异性结合速度输入Y。如果您有若干个实验条件，则将第一个输入A列，第二个放入B列，依此类推。

另一种替代方法是，将总结合输入到A列，将非特异性结合输入到B列。然后，使用“删除基线”分析，从A列中减去B列，以创建包含特异性结合的新结果表。

从特异性结合表中，单击分析，选择非线性回归，选择饱和结合方程窗格，然后选择双位点 - 特异性结合。

模型

位点1=BmaxHi*X/（KdHi+X）

位点2=BmaxLo*X/（KdLo+X）

Y=Site1 + Site2

 

解读参数

BmaxHi 和 BmaxLo 是以与Y相同单位对两个位点的最大特异性结合。

KdHi 和 KdLo 是平衡解离常数，以与X相同的单位。这是处于平衡状态时，达到一半最大结合所需的放射性配体浓度。

两位点结合的斯卡查德图

下图左侧显示了放射性配体与两个独立结合位点的结合，两者浓度相等，但Kd相差10倍。两条单独的曲线显示为虚点曲线和虚曲线。进行实验时，您无法观察单个分量，但可观察显示为一条实曲线的总和。请注意，这条曲线并非明显的双相曲线。

右侧窗格显示了在斯卡查德图上绘制的相同数据。与每个受体的结合数显示为直线（点线或虚线）。绘制在斯卡查德图上的总结合呈曲线。注意，代表与每种受体结合的两条线非曲线的渐近线。

如需绘制对应于非线性回归拟合的两条直线，请使用非线性回归确定的Bmax和Kd值创建一个新的数据表，定义如下所示的两条直线。

转至斯卡查德转换数据的图表，将新表拖动到该图表。使用“设置图表格式”对话框，使用连接线而非符号绘制表格中的两个数据集。