问题：未达到足够高浓度的结合等温线
上图显示了与特异性结合数据拟合的饱和结合方程。但所有浓度都相对较低（与结合的 Kd 相比），因此数据几乎形成一条直线。饱和结合曲线模型很好地拟合了数据（实线），曲线周围有一个狭窄的 95% 置信带（虚线）。但请看 Bmax 和 Kd 的置信区间（如方框所示）！它们的置信区间超宽，甚至出现了负值（不可能）。对于这些数据，曲线拟合得很好，但模型中的两个参数（Bmax 和 Kd）都没有拟合出合理的置信区间。这并不奇怪。数据甚至没有显示出一丝高原现象，因此数据根本无法定义 Bmax 和 Kd。
问题在于，这些数据与一个具有大量低亲和力受体（高 Bmax；高 Kd）或较少高亲和力受体（低 Bmax；低 Kd）的系统是一致的。下图展示了两种可视化方法。左图显示的拟合优度与上图相同，但最佳拟合曲线及其置信带延伸至更大浓度。虽然置信带在点附近很窄，但当它超出有数据的浓度时，置信带就会超宽。右图显示了两条不同的拟合曲线，Kd 分别为 200 nM 或 500 nM。曲线截然不同，但都接近数据。
看待这些数据问题的另一种方法是，Bmax 和 Kd 是相关的。Prism 可以报告协方差矩阵，作为非线性回归结果的一部分。由于只有两个参数，"矩阵"中只有一个值。Kd 和 Bmax 之间的协方差（范围从 0.0 到 1.0）为 0.9993。Prism 还可以报告每个参数的依赖度（范围也可以从 0.0 到 1.0）。在只有两个参数的情况下，两个参数的依赖度相同，本示例中的依赖度为 0.9986。这个依赖度还不够高，不足以让 Prism 宣布结果含糊不清，但这种指定的阈值（依赖度 > 0.9999）是任意设定的。
在这一点上，我们很容易放弃，认为如果没有更高浓度下的更多数据，就无法确定任何结果。但在某些系统中，尤其是使用 PET 扫描检测受体的系统中，这样的数据很典型。不可能使用更高浓度的配体。
拟合结合电位
从这些数据中可以了解到什么？数据几乎是线性的。这条线的斜率说明了什么？斜率，或者说初始斜率，被称为结合电位(1)。不要被 "势"这个词误导。它与势能和热力学无关。相反，它是对少量配体将发生多少结合的测量。
如果从特异性结合方程出发，求出它相对于 X（即浓度）的导数，并将 X 设为零，就可以得出特异性结合曲线的初始斜率。事实证明，这个斜率即结合力等于 Bmax/Kd。Bmax 的测量单位与数据中的 Y 值相同。Kd 的测量单位与 X 值相同。因此，结合电位的单位等于 Y 单位除以 X 单位。
Prism 可以拟合一条特异性结合曲线，还可以报告 Bmax/Kd 的比值及其置信区间。为此，您可以创建一个新的用户自定义方程，或者（更简单）克隆内置方程。然后转到定义方程对话框的最后一个选项卡。"报告变换"。选择报告两个参数的比值，并定义分子和分母。
在本示例中，Prism 发现结合电位为 242.1，置信区间为 183.4 至 300.7。置信区间相当窄，因此结果非常有用。
参考文献
1. Innis等：《可逆结合放射性配体体内成像的共识命名法》。脑血流与代谢杂志》（2007 年）第 27 卷（9）第 1533-1539 页
