引言

根据三元复合物模型，拟合变构调节剂结合的“竞争”曲线。注意，该模型假设变构调节剂过量，因此不会因为与受体结合而耗尽。由于变构调节剂结合与放射性配体不同的位点，因此术语“竞争”并不恰当，但我们在这里列出该术语的原因是实验设计与竞争结合所用的相同。

循序渐进

创建一张XY数据表。将未标记调节剂浓度的对数（单位为nM）输入X，并采用任何简便单位将特异性结合输入Y。

在数据表中，点击“分析”，选择“非线性回归”，选择“竞争结合方程”窗格，然后选择“变构调节剂滴定”。

根据您的实验设计，您必须将两项参数限制为常数值：

•RadioligandNM为标记配体的浓度（nM）。整个实验使用单一浓度的放射性配体。

•HotKdNM为标记配体的平衡解离常数（nM）。

还考虑将Y0（在没有调节剂的情况下，放射性配体结合）限制为常数值。

模型

AlloNM=10^（X+9）

KbNM=10^（logKb +9）

alpha=10^logAlpha

KAppNM=HotKDnm*（（（1+（AlloNM/KBNM））/（1+alpha*（AlloNM/KBNM））））

HotOccupancy=RadioligandNM/（RadioligandNM+HotKDnm）

Y=（Y0/HotOccupancy）*（RadioligandNM/（RadioligandNM+KAppNM）

 

 

解读参数

Kb 是调节剂结合的平衡解离常数（摩尔）。

α 是 三元复合物常数。α=1.0时，调节剂不会改变结合。如果α小于1.0，调节剂会减弱配体结合。如果α大于1.0，调节剂会增强结合。

Y0 为没有调节剂的情况下的放射性配体结合。请考虑将其限制为一个常数值。

注释

该模型设计用于分析未标记化合物通过变构位点起作用时的数据。由于标记和未标记配体通过不同的位点起作用，因此将这些类型的实验称为“竞争结合分析”并不合适（也不正确）。事实上在某些情况下，变构调节剂增强了放射性配体结合。

该模型是为拟合α的对数（而非α本身）而创建。这是因为α不对称（从0到1的所有值均意味着调节剂减弱结合，而从1到无穷大的所有值均意味着调节剂增强结合。在对数标度上，其值更加对称，因此在对数标度上计算的置信区间（如Prism所计算）更精确。

Y轴绘制了特异性结合曲线。即使抑制剂浓度非常高，特异性结合也不会降至零。这就是变构抑制的本质。如果α非常高，则结合几乎抑制到零。如果α不是很高，则最大抑制率更为适当。例如，如果α=3，则最大抑制率降至33%。

该模型假设变构调节剂过量，因此您添加的浓度非常接近其自由浓度。变构调节剂的浓度有限时（如G蛋白改变与许多受体结合的激动剂时），该模型不适用。没有明确的模型可处理这种情况。您需要使用隐式方程（等号两边均为Y）来定义该模型，而Prism不能处理此类方程。

参考文献                                                                          

A. Christopoulos和T. Kenakin，Pharmacol，版本54：323-374，2002